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MKBio TRIzol Reagent 总RNA抽提试剂
目录号 MF0403-100ML 售价 450.00元
规格 100ml 运输温度 冰袋
其他名称 总RNA提取试剂 保存温度 2-8℃保存
CAS号 N/A 有效期 至少一年
应用 总RNA提取 订购数量
产品简介:

TRIzol Reagent 总RNA抽提试剂


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产品关键词:

TRIzol Reagent;酚氯仿抽提;RNase-free H2O; Total RNA 总RNA提取;RNAlater;Invitrogen 15596026;


产品信息

产品名称

产品编号

规格            

价格(元)  

TRIzol Reagent 总RNA抽提试剂   

MF0403-100ML    

100ml

450


产品描述

TRIzol Reagent是一种即用型且操作迅捷的总RNA抽提试剂,适用样本广泛,包括人、动物、植物、酵母或细菌来源的细胞和组织样本。TRIzol Reagent是一种含酚、异硫氰酸胍和其他专利成分的单相溶液,有利于抽提分子量大小不一的各种RNA类型。TRIzol Reagent能够良好的维持RNA完整性,因能高效抑制样本匀浆过程中细胞破损和细胞组分溶解时释放的RNase活性。TRIzol Reagent能够同时处理大量样本,且以优化的方式一步法提取RNA,整个过程可在一小时内完成。


TRIzol Reagent分离的总RNA无蛋白质和DNA污染,适用于RT-PCR、Northern Blot、Dot Blot、poly(A)+筛选、体外翻译、RNase保护分析和分子克隆等下游实验。


保存与运输方法

保存:2-8℃保存,至少一年有效。

运输:冰袋运输。


注意事项

1)   所有离心管、枪头以及相关溶液都必须无RNase污染。对于塑料制品、玻璃和金属器皿、实验仪器等可使用懋康买球的固相RNase清除剂去除RNase(货号:MF0406-100ML),或者用含0.01% DEPC(货号:MS5513-10ML)的去离子水浸泡过夜,之后高压灭菌、烘干。对于实验溶液可使用懋康买球的液相RNase清除剂(货号:MF0407-1.5ML)来处理或用DEPC处理水(比如:MF0404-500ML)来配制。

2)   对新鲜组织或细胞样本的抽提效果通常优于冻存的组织或细胞,由于组织或细胞冻融过程中可能存在一些RNase释放出来并酶切样品。若是不能及时抽提RNA,推荐先加入适量TRIzol Reagent,之后裂解样品后再冻存。

3)   TRIzol Reagent含有毒物质,请在操作过程中注意好防护工作,戴好手套和护眼罩,避免皮肤接触。在通风橱内完成操作,避免呼吸道吸入。

4)  为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


使用方法

1.  需要自行准备的材料

水浴锅或微量恒温仪(Heat block)

异丙醇

75%乙醇

含0.5% SDS的RNase-free水或RNase-free水或DEPC处理水

【可选】RNase-free的糖原(核酸助沉剂)


2.  样本要求

【重要】:样本收集后立即进行RNA分离,或样本收集后立即冻存样本并保存在-80℃或液氮中直至RNA抽提。

样本类型

每mlTRIzol Reagent处理的起始样本量

组织(新鲜组织或保存在RNAlater等稳定液内的组织)

50~100mg组织

单层生长的细胞

1×105~1×107单细胞层(35mm培养皿,10cm2)

悬浮生长的细胞

5-10×106个细胞(动植物或酵母来源)或1×107个  

细胞(细菌来源)

 

3. 样本准备与分相

3.1 根据起始材料用TRIzol Reagent裂解和匀浆样本。

◇组织样本

按比例每50~100mg 组织加1ml TRIzol Reagent,之后用合适的方法进行匀浆。通常用50~100mg组织即可获得足量的RNA,满足绝大多数下游实验。加入过量组织或过少TRIzol都容易导致RNA提取失败。

a)对于研钵研磨:将液氮冻存组织,放到研钵中研磨成粉末,之后加入1ml TRIzol,继续研磨至组织完全裂解【研磨要迅速,最好不要超过1min】。b)对于玻璃匀浆器匀浆:加入1ml TRIzol上下手动匀浆组织10~15次。c)对于机械匀浆器:将组织放入塑料管内,将塑料管置于冰浴烧杯内,加入1ml TRIzol,将分散器头垂直插入管内与组织直接接触,设置转速12,000~20,000 rpm,上下移动试管10~20次,直至组织完全打散,无明显可见大块即可。

◇单层生长的细胞

吸尽培养基,之后往35mm培养皿(10cm2)内加入1ml TRIzol Reagent,晃动3~5次,再用移液枪上下吹打3~5次,使其充分裂解。【按照10cm2培养面积加入1ml TRIzol加量。比如:六孔板每孔加入1ml TRIzol,12孔板每孔加0.5ml TRIzol】

◇  悬浮生长的细胞

离心收集细胞,吸尽上清,每5-10×106个细胞(动植物或酵母来源)或1×107个细胞(细菌来源)加入1ml TRIzol Reagent【加入TRIzol前不要清洗细胞,否则会增加mRNA降解的可能性】。用枪吹打几次或适当涡旋,使其充分裂解。某些酵母和细菌如裂解不充分,可用匀浆器匀浆,使其完全裂解。

【注意】:样本体积不要超过加入TRIzol体积的10%。

 

3.2 特殊样本处理【可选】:对于某些富含蛋白,多糖或脂肪的样本,经TRIzol Reagent裂解后可能会有不溶物或油脂状漂浮物出现。此时需12,000g 4℃离心10min,之后吸取澄清的上清液至一新的离心管中。

3.3 室温孵育5min,使得核蛋白体完全分解。

3.4 按照每1ml TRIzol Reagent加入0.2ml 氯仿,盖紧盖子。涡旋混匀或用手剧烈晃动15s,室温孵育2~3min。

3.5 于12,000g 4℃离心15min。离心后混合物分为三层:下层酚-氯仿层,中间层,和上层无色的水相层。RNA无一例外的停留在水相层中。水相层的容量约为所加TRIzol Reagent体积的60%。用枪吸取上层无色水相到一新的离心管中,避免吸到任何中间层或下层成分。

【注意】:如果希望分离DNA和蛋白,请保留中间层和有机层。

 

4.      RNA分离

4.1    RNA的沉淀:a)【可选】如果起始样本量比较少(<106个细胞或<10mg组织),加入5-10μg RNase-free的糖原作为核酸助沉剂到水相中。b)按每ml起初TRIzol Reagent加入0.5ml异丙醇,颠倒数次混匀,室温沉淀10min。如果希望提取microRNA等小RNA,推荐-70℃沉淀过夜。c)于12,000g 4℃离心10min,在管底可见RNA沉淀,弃上清。



4.2    RNA的清洗:a)按每ml起初TRIzol Reagent加入1ml 75%乙醇重悬沉淀。【注:RNA在75%乙醇中-20℃至少保存1年,4℃至少1周】;b)低速漩涡或颠倒混匀,于7,500g 4℃离心5min,弃上清。再用离心机甩一下(>5,000rpm, 离心1秒),小心吸尽液体。c)操作的最后,简单干燥RNA沉淀(空气干燥或真空干燥5~10min)。不要在真空管里离心干燥RNA。尤为重要的是,不能让RNA沉淀完全干燥,否则会极大的降低其可溶性。部分溶解的RNA样本的A260/A280比值<1.6。

4.3    RNA的溶解:用20~50μl 无RNases水或含0.5% SDS的无RNases水溶解RNA,用枪上下吹打2~3次,使其充分溶解,置于-70℃保存或直接用于后续实验,如果后续要做酶切反应请勿用SDS。

【注意】:对于肝脏、胰腺、肾脏等RNase含量较高的组织,沉淀可用100%去离子甲酰胺(货号:MS5515-50ML)溶解。

 

5.      RNA产量的测定

5.1    用无RNase水稀释RNA,之后测定在260nm和280nm的吸收值。

5.2    使用公式A260×稀释倍数×40= μg RNA/ml。

5.3    计算A260/A280比值,比值在1.8~2.0之间视为纯度较高,浓度>4 μg/ml的样品适用于分光光度计测定。

5.4    进行甲醛变性琼脂糖电泳,确定RNA的完整性和污染情况。


相关产品

货号

名称

规格            

MF0403-100ML     

TRIzol Reagent总RNA抽提试剂

100ml

MF0404-500ML

DEPC-treated Water (DNase、RNase free) DEPC水(无DNase、RNase )   

500ml

MF0406-100ML

Surface RNase Remover固相RNase清除剂

100ml

MF0407-1.5ML

Solution RNase Remover液相RNase清除剂

1.5ml

MF0409-50ML

RNATector Stabilization Solution RNA稳定保存液

50ml

MF0410-100ML

RNATector-ICE Frozen Tissue Transition Solution冰冻组织RNA稳定液

100ml

MF0412-1G

Glycogen (5mg/ml)核酸助沉剂糖原(5mg/ml)

1ml

MF0413-500UL

Glycogen (20mg/ml)核酸助沉剂糖原(20mg/ml)

500?l

MF0416-100ML

DNase/RNase-Free Water

100ml

MS5515-50ML

Formamide Deionized去离子甲酰胺

50ml


附录1 常见问题与解决方案

出现问题

可能起因

解决方案

比预期产量低

样本未充分匀浆或裂解

降低起始样本量;剪切组织到更小块,确保组织完全浸泡到TRIzol Reagent以达到完全裂解。

沉淀未完全溶解

通过反复用枪吸取样品和在50~60℃加热样品的方式来增加溶解率

样本被降解

样本未及时处理或收集后未马上冻存

样本必须在收集后马上处理或立即冻存

溶液或使用管子未经RNase去除处理

确保实验中所用到的耗材和溶液不受RNase污染

样本制备物没有保存在适当温度下

将RNA样本保存在-70℃。

DNA污染

吸取水相层时带入中间/有机相层

不要尝试吸取离心分层后的所有水相层

RNA A260/A280低

在不足量的TRIzol Reagent内匀浆样品,RNA与蛋白质、DNA未完全分离

加入足量的TRIzol Reagent到样本

匀浆后样品未在室温放置5min,RNA与核蛋白未完全解离

匀浆后样品需室温放置5min

水相中混有有机相,带有蛋白质和DNA的污染

不要尝试吸取离心分层后的所有水相层

抽提得到的RNA沉淀未完全溶解

RNA需要完全溶解

 

 

 — —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

 

 

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