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Deoxyribonuclease I (DNase I) 脱氧核糖核酸酶I,来源于牛胰腺 (冻干粉形式,即用型液体形式,懋康买球)
时间:2018-04-28     作者:懋康原创     文章来源:懋康买球    

Deoxyribonuclease I (DNase I) 脱氧核糖核酸酶I,来源于牛胰腺

(冻干粉形式,即用型液体形式,懋康买球)

 

关键词:

脱氧核糖核酸酶I DNase I;核糖核酸酶 RNase;全能核酸酶 Benzonase;Sigma D5025; Sigma DN25;CAS:9003-98-9;

 

需求背景:

分子买球学实验中,在RNA样品的制备过程中,常常会受到样品中不可避免存在的DNA的干扰,为了保证RNA样品的纯度以及满足后续RNA相关研究的顺利开展,需要DNase I有针对性的酶解DNA。另外,在蛋白制品的生产中比如抗体,重组蛋白,细胞裂解这步释放的内含物中除掉蛋白外,往往有很高含量的核酸(DNA, RNA),核酸的存在严重干扰制品的纯化和活性,为此,利用DNase I和RNase组合方式来去除核酸干扰,也很必要。还有,在其他的实验比如TUNEL细胞凋亡检测中常用DNase I对细胞样本核酸进行剪切,以得到实验所需的阳性对照。

 

基本介绍:

脱氧核糖核酸酶I,英文Deoxyribonuclease I,缩写DNase I,在大多数细胞和组织中都能发现的一种核酸内切酶,偏好切割邻近嘧啶的磷酸二酯键,产生5’端为磷酸基团、3’端为羟基的多聚核苷酸(见下图反应流程图),平均消化产物最小为多聚四核苷酸。Mg2+存在条件下,DNase I可随机识别和切断DNA任一条链上的任意位点;而在Mn2+存在条件下,DNase I识别DNA的两条链并在几乎相同的位点进行切割。DNase I可水解多种形式DNA,如单链DNA、双链DNA,甚至染色质(其切割速率受组蛋白影响)。

脱氧核糖核酸酶I,英文Deoxyribonuclease I,缩写DNase I,最早从胰腺中分离而来,至今哺乳动物胰腺也是最主要的来源之一。DNase I以两对二硫键结合的多种糖蛋白混合形式存在。最佳的工作范围是pH 7-8,DNase的活性依赖于Ca2+,并可被二价金属离子如Co2+,Mn2+,Zn2+等激活。5mM Ca2+可保护酶使其不被水解,而0.1mM Ca2+可使酶失活速率降至原来的1/2。

 

主要应用:

◇   制备不含DNA的RNA样本;

◇   RT-PCR反应前RNA样本内基因组DNA等可能存在DNA污染的去除;

◇   T7,T3,SP6等RNA聚合酶催化的体外RNA转录后DNA模板的去除;

◇   DNase I足迹法(DNase I footprinting)研究DNA-蛋白质相互作用;

◇   缺口平移法标记探针用;

◇   制备随机DNA片段文库;

◇   TUNEL细胞凋亡检测中用于剪切DNA制备阳性对照;

 

我司(懋康买球MKBio)提供的脱氧核糖核酸酶I(DNase I),来源于牛胰腺,通过亲和色谱纯化所得,不含RNase和蛋白酶污染。为了满足工业用户和科研用户的不同应用需求,我们提供冻干粉(不同比活)和即用型液体形式的DNase I。具体信息如下:


一、脱氧核糖核酸酶I(DNase I)(冻干粉形式,比活力≥2000 Kunit U/mg protein)

1.1 产品特征:

1)   CAS NO:9003-98-9

2)   蛋白纯度:≥80%(biuret),色谱纯化

3)   比活力:≥2000Kunit Units/mg protein

4)   活力定义:25℃,pH5.0条件下DNase催化底物DNA,使每毫升每分钟ΔA260增加0.001的变化定义为一个酶活力单位(Kunitz unit)。

5)   激活剂:多种二价金属离子如Mg2+、Mn2+、 Ca2+、Co2+、and Zn2+

6)   抑制剂:β-巯基乙醇;螯合剂;SDS;肌动蛋白;并没有特异性抑制DNase I酶活的通用抑制剂,比如柠檬酸盐抑制Mg2+活化的DNase I,但不能影响Mn2+激活的DNase I。

7)   溶解性:溶于0.15M NaCl(5mg/ml),无色透明溶液


1.2 订购信息:产品性能媲美Sigma D5025,本品生产至少十年以上,销售到国内各大实验室,欢迎各大工业和科研用户前来咨询。电话:021-54736159,QQ:2971634497。

产品名称

产品编号

规格         

价格          

Deoxyribonuclease I (DNase I) from Bovine Pancreas, ≥2,000 units/mg protein

脱氧核糖核酸酶I,来源于牛胰腺

MF0401-15KU   

15KU

380

MF0401-50KU

50KU

980


二、脱氧核糖核酸酶I(DNase I)(冻干粉形式,比活力≥500 Kunit U/mg protein)

2.1 产品特征:

8)   CAS NO:9003-98-9

9)   分子量:~31 kDa

10)同义名:DNase I, Deoxyribonucleate 5’-oligonucleotidohydrolase, Deoxyribonuclease A 脱氧核糖核酸 5′-寡核苷酸水解酶,脱氧核糖核酸酶A

11)  比活力:≥500 Kunit Units/mg protein

12)  活力定义:在50?l含40mM Tris-HCl, pH8.0,2.5 mM MgSO4,1mM CaCl2的反应缓冲体系中,37℃,10min内完全降解1?g λ-DNA所需的酶量即为一个活力单位。此反应条件下得到的一个单位DNase活力约等于一个Kuntiz unit。

13)  激活剂:多种二价金属离子如Mg2+、Mn2+、 Ca2+、Co2+、and Zn2+

14)  抑制剂:EGTA,EDTA,盐离子浓度(>100mM)都能降低DNase活性

15)  热失活:含终止溶液(20mM EGTA,pH 8.0)内65℃,处理10min

16)  溶解性:溶于缓冲液(≥1mg/ml in 20mM Tris-HCl(pH 7.5), 1mM MgCl2, 50% 甘油)


2.2 订购信息:产品性能媲美Sigma DN25。比活低于MF0401(≥2,000 Kunit U/mg protein),价格更加经济。欢迎咨询,电话:021-54736159,QQ:2971634497。

产品名称

产品编号

规格 

价格        

Deoxyribonuclease I (DNase I) from Bovine Pancreas, ≥500 units/mg protein  

脱氧核糖核酸酶I,来源于牛胰腺

MF0402-10MG   

10MG     

250

MF0402-50MG

50MG

680


三、脱氧核糖核酸酶I(DNase I)(即用型溶液)

3.1 产品特征:

试剂盒形式提供,其中DNase I以即用型溶液(1U/μl) 形式提供,酶经过严格质控能极好的消化模板;还提供10× Reaction Buffer和10× Stop Solution,节省了试剂配制的时间,用起来更加快捷。


3.2 试剂盒包装:

组分编号

组分名称

货号(规格)

MF0405-200U      

MF0405-1000U    

MF0405-A    

DNase I Solution (RNase & Protease-free)     

200U

1000U

MF0405-B

10× Reaction Buffer

200μl

1ml

MF0405-C

10× Stop Solution

200μl

1ml


3.3 使用方法【以RT-PCR反应前RNA样本内DNA污染的去除为例】

1)DNA模板经核酸内切酶线性化,用酚/氯仿和氯仿/异丙醇提取DNA,用乙醇沉淀后,溶于适量无菌去离子水中。

2)往一个RNase-free EP管内依次加入下列试剂:

RNA样本

1μg             

10× Reaction Buffer

1μl

用DEPC-treated Water补充    

至9μl

DNase I (1U/μl)

1μl

【注意】:如果需要处理较大量的RNA样品,可按比例放大上述反应体系。条件许可下最好往体系内加入适量RNase抑制剂(货号:MF0218-2KU)以防止RNA降解。

3)   37℃孵育30min。

4) 往上述体系内加入1μl 10× Stop Solution使其终浓度为1×,混匀。之后65℃孵育10min使DNase I失活。【注意】:一定要先加入10× Stop Solution,然后再加热失活RNase I,否则先加热可能引起RNA被降解。

5)加热处理后的RNA样品即可直接用作RT-PCR反应用的模板。


3.4  订购信息:即用型试剂盒,科研单位且用量不多用户的首选。欢迎咨询,电话:021-54736159,QQ:2971634497。

产品名称

产品编号

规格            

价格             

DNase I Solution (RNase & Protease-free)          

脱氧核糖核酸酶I溶液(无RNase &蛋白酶)

MF0405-200U          

200U

198

MF0405-1000U

1000U

848

 

关产品

货号

名称

规格          

MF0402-10MG      

Deoxyribonuclease I (DNase I) from Bovine Pancreas, ≥500 units/mg protein      

10MG

MF0401-15KU

Deoxyribonuclease I (DNase I) from Bovine Pancreas, ≥2,000 units/mg protein

15KU

MF0405-200U

DNase I Solution (RNase & Protease-free) 脱氧核糖核酸酶I溶液

200U

MF0203-100MG

Ribonuclease A (RNase A) from Bovine Pancreas

100mg

MP1509-25KU

Benzonase Nuclease 全能核酸酶

25KU

MF0201-100MG

Proteinase K, Molecular Biology Grade蛋白酶K

100mg

MF0218-2KU

RNase Inhibitor (40U/?l), Murine小鼠RNA酶抑制剂

2KU

MF0404-500ML

DEPC-treated Water (DNase、RNase free) DEPC水(无DNase、RNase ) 

500ml

 

 — —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

 

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