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活体成像研究底物之:Firefly D-Luciferin D-虫荧光素(Luc基因)
时间:2018-10-19     作者:懋康原创     文章来源:懋康买球    

活体成像研究底物之:

Firefly D-Luciferin D-虫荧光素(Luc基因)

(活体成像研究/体外买球发光研究/转录水平研究)

 

 

【重要提示】:

1)见我司懋康买球(MKBio)整理的活体成像研究底物之:腔肠素(Coelenterazine)产品专题

2)见我司懋康买球(MKBio)整理的活体成像研究底物之:D-荧光素(D-luciferin)产品专题

3)见我司懋康买球(MKBio)整理的D-荧光素(D-luciferin)常见问题

4)见我司懋康买球(MKBio)整理的D-荧光素(D-luciferin)体外使用指南;敬请期待。。。。

5)见我司懋康买球(MKBio)整理的D-荧光素(D-luciferin)体内使用指南;敬请期待。。。。

 

搜索关键词:

Luc reporter gene 报告基因;Luciferase 萤火虫荧光素酶;In vivo imaging 活体成像研究;荧光素酶/ATP水平研究;报告基因质粒;报告基因病毒颗粒;萤火虫荧光素;甲虫荧光素;CAS:103404-75-7;

 

基本描述:

D-荧光素(D-Luciferin)是荧光素酶(Luciferase)的常用底物,普遍用于整个买球技术领域,特别是体内活体成像技术。作用机制是在ATP和荧光素酶的作用下,D-荧光素(底物)被氧化发光。当荧光素过量时,产生的光量子数与荧光素酶的浓度呈正相关性(见下图)。将携带荧光素酶编码基因(Luc)的质粒转染进入细胞后,导入研究动物如大小鼠体内,之后注入荧光素,通过买球发光成像技术(BLI)来检测光强度变化,从而实时监测疾病发展状态或药物的治疗功效等。也可以利用ATP对此反应体系的影响,根据买球发光强度的变化来指示能量或生命体征。

 

基本应用:

1)体内活体成像In vivo imaging;荧光素酶标记的肿瘤细胞、干细胞或传染疾病通常注射入研究动物模型比如大小鼠内进行研究,从而对动物模型进行实时和非侵略性的监测疾病进程和/或药效。

2)体外研究,包括荧光素酶和ATP水平分析;报告基因分析;高通量测序和各种污染检测。

 

常见商业化类型的差异(荧光素钾,钠,游离酸):

目前市场上常见的有三种产品形式,D-荧光素(游离酸),D-荧光素(钠盐),和D-荧光素(钾盐)。这三种产品主要差别在于溶解特性。

1)D-荧光素(游离酸)在水以及缓冲体系内的溶解性都很弱,除非溶于弱碱如NaOH和KOH溶液。溶于甲醇(10 mg/ml)和DMSO(50 mg/ml)。

2)D-荧光素(钠盐)和D-荧光素(钾盐)能够非常容易且快速的溶入水或者缓冲液中,使用方便,溶剂无毒性,特别适合体内实验。配成溶液后的三种产品,在绝大多数应用上都没有实质性的差别。

3)D-荧光素(钠盐)和D-荧光素(钾盐)基本上没有差别,主要是使用习惯等因素影响。整体来看,钾盐的应用文献明显多于钠盐。

 

使用方法【体内成像/腹腔注射】

一.  储存液制备(Luciferin preparation)

1.1    将D-荧光素钾盐(或D-荧光素钠盐)冻干粉回至室温,溶于DPBS(无钙/镁)使其终浓度为15mg/ml。

1.2    用0.22μm滤膜过滤除菌,条件许可现配现用。若单次实在用不完,则分装后置于≤-20℃保存,避免反复冻融。一旦使用,放到4℃解冻,保持冰冷且避光。


二.动力学曲线建立(Kinetic curve)

由于D-荧光素进入体内的买球分布非常快速且动力学具组织依赖性,因此,研究人员需正式实验前确定自身动物在D-荧光素注射后的成像采集最佳时间。通过建立动物模型的荧光素酶动力学曲线来完成。


D-荧光素给药的方式有腹腔注射(ip)、静脉注射(iv)或皮下注射(sc),通常给药方式为腹腔和静脉。以下以腹腔注射为例。


2.1 如下腹腔注射(i.p.)D-荧光素。如果给药前需麻醉小鼠,需要注意此步操作可能稍微延长动力学(荧光素酶峰值表达时间)。

2.2 a)如果在动物保持清醒时给药,等待三分钟,之后按照所选方法麻醉动物(气化或注射麻醉)。b)将麻醉后动物置于成像室内,给药后约5min开始第一次拍照。

2.3 对于腹腔注射模型,每5-10min(最长达40-60min)拍一次照以建立荧光素酶表达的动力学曲线。【大多数注射麻醉药持续20-30min,要完成一次完整的动力学研究可能需要再给一次麻醉药物。使用2%异氟烷气体麻醉健康动物能在活体成像系统如IVIS内安全放置45min。】

2.4 根据模型建立的动力学曲线选择最佳时间点采集图像。【许多模型研究表明腹腔或皮下注射后约10-20min达到信号峰值,静脉注射后约2-5min达到信号峰值。】


三.腹腔注射(i.p.)技术要点

最佳注射点(Preferred site)

动物左下腹部(lower left abdominal quadrant)

针头大小(Needle size)

25 gauge,通常与1ml(1 cc)注射器配套使用

体积(Volume)

每10g体重小鼠加入100μl 15mg/ml D-荧光素,相当于150mg/kg的给药剂量。【腹腔单次注射1ml无刺激性溶液对动物无任何压力】。

动物位置(Position of animal):

手动固定,背卧位(腹部向上),动物颅(头部)朝下。轻轻晃动小鼠2-3次使得肠道向下移动,在下腹区域创造一个空腔。

注射(Injection):

Needle should be bevel-side up and slightly angled when entering the abdominal cavity. Penetrate just through abdominal wall (about 4-5mm). The tip of the needle should just penetrate the abdominal wall of the animal’s left lower abdominal quadrant.

 

应用示例【买球化学发光体内成像】

Fig. 1 Image illustrates the IVIS spectrum imager and a mouse placed inside the camera box.

 

Fig. 2 Bioluminescence in vivo imaging. A. Representative luciferase time course (every 2 min) imaging of mice bearing subcutaneous tumors injected with luciferin. B. Graph illustrates the bioluminescence saturation of the whole mouse (displayed in A.) obtained

 

产品订购:懋康买球(MKBio)提供的D-荧光素(D-luciferin)已经广泛供货给国内外各大研究所、医院研究室、买球医药公司,绝对口碑产品,零差评,欢迎所有新老客户咨询和选用我们产品。大部分用户只要需要都会购买第二次第三次~~~。我们有能力提供大包装,欢迎咨询,电话:021-54736159, QQ:2971634497。

货号

产品名称

规格                 

价格(元)      

MX4602-100MG          

D-Luciferin, Sodium Salt D-荧光素(钠盐)

100mg

998

MX4602-500MG

D-Luciferin, Sodium Salt D-荧光素(钠盐)

500mg

2500

MX4602-1G

D-Luciferin, Sodium Salt D-荧光素(钠盐)

1g

4500

MX4603-100MG

D-Luciferin, Potassium Salt D-荧光素(钾盐)

100mg

998

MX4603-500MG

D-Luciferin, Potassium Salt D-荧光素(钾盐)

500mg

2500

MX4603-1G

D-Luciferin, Potassium Salt D-荧光素(钾盐)

1g

4500

MX4601-250MG

D-Luciferin Firefly, Free Acid D-虫荧光素(游离酸)     

250mg

1800

MX4601-500MG

D-Luciferin Firefly, Free Acid D-虫荧光素(游离酸)

500mg

3000

MX4601-1000MG

D-Luciferin Firefly, Free Acid D-虫荧光素(游离酸)

1g

5800

MX4604-10MG

DMNPE-caged Luciferin D-荧光素(DMNPE笼闭)

10mg

1350

MX4604-50MG

DMNPE-caged Luciferin D-荧光素(DMNPE笼闭)

50mg

5440

 

注意事项

1)   我司懋康买球(MKBIO)提供所有产品仅作科研用途,请不要用于临床或诊疗用途。

2)   为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

附录I 各种给药途径和模型动物的建议位点、针头大小和注射体积

给药途径           

仓鼠

小鼠

大鼠

IM肌肉注射

位点

体积

大小  

Quadriceps, gluteals

≤0.15 ml

<23 gauge

Quadriceps

≤0.03 ml

<23 gauge

Quadriceps, gluteals, triceps

≤0.25 ml

<22 gauge

IP腹腔注射

位点

体积

大小

Lower right quadrant of abdomen

≤3 ml

<21 gauge

Lower right quadrant of abdomen

≤2 ml

<25 gauge

Lower right quadrant of abdomen

≤5 ml

<22 gauge

IV静脉注射

位点

体积

大小

Not recommended

Lateral tail veins

≤0.5 ml

<27 gauge

Lateral tail or saphenous veins

≤2 ml slowly

<22 gauge

Intragastric 

灌胃

位点

体积

大小

Stomach

N/A

18-22 gauge, 4-4.5cm long, Bulbed feeding needle

Stomach

5-10ml/kg

18-22 gauge, 2-3cm long, Bulbed feeding needle

Stomach

5-10ml/kg

15-18 gauge, 6-8cm long, 

Bulbed feeding needle or 8 French flexible catheter

SC皮下注射

位点

体积

大小

Neck, back

≤3 ml

<21 gauge

Neck, back

≤1 ml

<22 gauge

Neck, back,abdomen

≤5 ml

<21 gauge

 

 

 

 — —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

 


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