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Cell-Tracker细胞示踪/细胞追踪荧光探针专题
时间:2021-09-10     作者:懋康买球     文章来源:懋康买球原创    

Cell-Tracker细胞示踪/细胞追踪荧光探针专题
Cell-Tracker Fluorescent Probes

关键信息:

Cell-Tracker系列示踪探针绿色橙色红色深红色,多重标记;短中期示踪;


专题标签:

Cell Tracking 细胞示踪;Cell movement 细胞运动;Cell-Tracker Green CMFDACell-Tracker Orange CMTMRCell-Tracker Red CMTPXCell-Tracker Deep Red


背景需求:

细胞运动和定位研究需要专门的探针染料,首先必须要对活细胞无毒性,还要同时具有多种荧光颜色可供选择,以便与不同的仪器激光波长和滤光片匹配并能与抗体标记或其他细胞分析标记探针共染色。


检测细胞运动和定位的最简单方法就是使用具有膜通透性的探针染料进入细胞并在加载后转变为膜非通透性的产物。理想的细胞示踪染料需要可存留于分裂多代后的子细胞中,但不会通过接触转移到相邻细胞中。Cell-Tracker系列示踪染料就是在这样的背景下开发而来:在工作浓度下保持稳定且无细胞毒性,可稳定存留在细胞中,且在生理 pH 条件下可发出明亮的荧光。Cell-Tracker示踪荧光染料还具有多种发射光谱,可轻松与抗体标记结合使用。


产品描述:

Cell-Tracker荧光探针是用来监测细胞运动、定位、增殖、迁移、趋化和侵袭的优秀工具。

Cell-Tracker荧光探针能自由穿透细胞膜进入细胞,在胞内转化生成不具细胞膜渗透性的反应产物。Cell-Tracker荧光探针(除了Cell-Tracker Deep Red)含有一氯甲基或溴甲基基团,与巯基反应,利用谷胱甘肽S转移酶介导的催化作用。大多数细胞中谷胱甘肽含量很高(高达10mM),谷胱甘肽转移酶普遍存在。Cell-Tracker Deep Red含一琥珀酰亚胺酯反应基团,与蛋 白上的胺基反应。一旦转化为不可逆产物,这些产物几次传代都能良好的保留在活细胞中。在细胞群内,染料只会转移到子代细胞,不会转移到邻近细胞。

Cell-Tracker探针特地设计使其至少72h(典型有3~6代)能展示荧光,此染料表现出理想的示踪特征:稳定、工作浓度下无毒性、良好保留在细胞,且在生理pH下呈明亮荧光。


重要特征:

① 可快速加载标记(通常 15 分钟至 1 小时)

② 短期追踪(一般 3-6代或72h

③ 具有较强的耐光漂白/抗光淬灭特性

④ 荧光信号亮度适中

⑤ 信号分布于整个细胞

⑥ 适合荧光显微镜和HCS检测

⑦ 提供多种发射光谱的Cell-tracker示踪探针,适合多标实验(见表1)。

1. Cell-Tracker荧光探针的光谱特征

货号

名称

分子量

常用检测通道

Ex/Emnm[1]

MX4107-100UG

Cell-Tracker Green CMFDA

464.9

FITC

492/517 [2]

MX4108-100UG

Cell-Tracker Orange CMTMR

554.0

TRITC

541/565

MX4109-100UG

Cell-Tracker Red CMTPX

686.3

Rhodamine

577/602

MX4110-30UG

Cell-Tracker Deep Red

698.3

Cy5

630/650

[1] 最大吸收和发射荧光,在水溶性缓冲液或甲醇内确定。在细胞环境内荧光值可能有些许变化。

[2] CMFDA本身无色和无荧光,直至胞内酯酶切割掉酯化基团。酯化基团的水解得到产物的荧光特征如表所述。


染色示例:

 

Fig 1. Co-culture of CellTracker? labelled fibroblasts (green) and hESMPs (red) on bilayer membranes of either PHBV–PLA or PHBV–PCL. Ref.Frazer J. Bye et al. Development of bilayer and trilayer nanofibrous/microfibrous scaffolds for regenerative medicine. Biomater. Sci., 2013, 1, 942-951.


 

Fig 2. Measuring O2 exchange in RBCs using single-cell O2-saturating imaging. (C) Wild-type RBCs loaded with a mixture of Deep-Red and Green, showing fluorescence in oxygenated and deoxygenated microstreams. Ref.Sarah L. Richardson, Alzbeta Hulikova, Melanie Proven, Ria Hipkiss, Magbor Akanni, Noémi B. A. Roy, Pawel Swietach. Single-cell O2 exchange imaging shows that cytoplasmic diffusion is a dominant barrier to efficient gas transport in red blood cells.Proceedings of the National Academy of Sciences May 2020, 117 (18) 10067-10078;


订购信息:

货号

产品名称

规格

价格(元)

MX4107-100UG

Cell-Tracker Green CMFDA 活细胞示踪探针(绿色)

2×50μg

980

MX4108-100UG

Cell-Tracker Orange CMTMR 活细胞示踪探针(橙色)

2×50μg

1100

MX4109-100UG

Cell-Tracker Red CMTPX 活细胞示踪探针(红色)

2×50μg

980

MX4110-30UG

Cell-Tracker Deep Red 活细胞示踪探针(深红色)

2×15?g

788

MX4111-1Kit

Cell-Tracker Three-color Trial Kit (Green/Red/Deep red) 活细胞示踪三色组合试剂盒(绿色/红色/深红色)

1kit

1568

 

常见问题(陆续加更中。。。。。。)

 我的实验需要做细胞迁移研究(约4h),需要对细胞做荧光标记,有推荐的产品?

比如:可选择钙黄绿素(Calcein AM)和二乙酸荧光素(FDA)来做此用途。由于这些染料不会插入或共价结合到任何其它细胞成分,它们在胞内的滞留时间比较短,因为某些细胞类型可能极其活跃的将染料泵出细胞。像Cell-Tracker系列染料,包含要么温和巯基反应的氯甲基基团要么胺基反应的NHS基团,使得探针共价结合到细胞内容物中,使得具更好的滞留效果。不管是哪种探针,用户根据经验来确定在所用细胞类型内的滞留时间。


 我的实验用Calcein AM来标记细胞,但第二天成像,发现没有荧光信号,为什么?

钙黄绿素(Calcein AMMX3011)是良好的细胞示踪探针,以及常用的细胞质染料。但,不会与胞内内含物结合,可能几个小时就会被细胞泵出体外。钙黄绿素在活细胞内的滞留时间取决于不同细胞的内在特征和培养条件。

如果要做长期成像,更推荐使用具反应性的细胞质染料比如:CFDA SEMX4104-25MG)或Cell-tracker示踪探针。


我的实验对两种细胞染色,一种用Cell-tracker green,一种用Cell-tracker Red,但看起来红色与绿色染色细胞间有交叉干扰,为什么?

一种可能性是染料间存在光谱渗透。可通过检查单一染色细胞,比如:对于红色染料标记细胞,用绿色荧光来检测;对于绿色染料标记细胞用红色荧光来检测,用另一种颜色的对应滤片来成像检测。通过对这些对照的观察,发现有光谱渗透,可通过降低染料标记浓度来降低染料亮度,或使用光谱间隔更大的染料重新标记。如果不存在光谱渗透,还有一种可能性是染色后细胞并未充分清洗,使得某些未插入的染料保留在新的染色体系内进而标记上其它细胞。增加清洗次数和延长时间有可能改变这个问题。

 

——Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】


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